পেপটাইড ঘনীভবনের জন্য বিকারক

বর্তমানে, পেপটাইডের সংশ্লেষণে, কার্বক্সিল অ্যাক্টিভেশন পদ্ধতিগুলি প্রধানত পেপটাইড প্রতিক্রিয়া সম্পূর্ণ করতে ব্যবহৃত হয়। অ্যামিনো অ্যাসিডগুলিকে অ্যাসিড ক্লোরাইড, অ্যাজাইড, প্রতিসম অ্যানহাইড্রাইড এবং মিশ্র অ্যাসিড অ্যানহাইড্রাইডে সক্রিয় করার জন্য ব্যবহৃত প্রথম পদ্ধতিগুলি ছিল। যাইহোক, এই অবস্থার অধীনে অ্যামিনো অ্যাসিড রেসিমাইজেশনের অস্তিত্বের কারণে, প্রতিক্রিয়া বিকারকগুলির বিপদ এবং প্রস্তুতির জটিলতার কারণে, তারা ধীরে ধীরে পরবর্তী ঘনীভবন বিকারক দ্বারা প্রতিস্থাপিত হয়েছিল, যা তাদের গঠন অনুসারে দুটি প্রকারে বিভক্ত করা যেতে পারে।: প্রধান ঘনীভবন বিকারকগুলি হল: কার্বোডাইমাইড টাইপ, অনিয়াম লবণের প্রকার (ইউরনিয়াম)।

প্রধানত অন্তর্ভুক্ত: DCC, DIC, EDC.HCl অপেক্ষা। DCC ব্যবহার করুন প্রতিক্রিয়া বহন করুন, DCU এর কারণে, বিদ্যমান DMF এর খুব কম দ্রবণীয়তা রয়েছে এবং এটি সাদা অবক্ষেপ উৎপন্ন করে, তাই এটি সাধারণত কঠিন-ফেজ সংশ্লেষণে ব্যবহৃত হয় না। যাইহোক, যেহেতু এটি সস্তা, এটিকে তরল-ফেজ সংশ্লেষণে পরিস্রাবণের মাধ্যমে অপসারণ করা যেতে পারে এবং এটি এখনও ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়। EDC.HCl এর জলে দ্রবণীয়তার কারণে, এটি প্রায়শই পলিপেপটাইড এবং প্রোটিনের সংযোগে ব্যবহৃত হয় এবং এটি বেশ সফলও হয়। যাইহোক, এই ধরনের ঘনীভবন বিকারকগুলির একটি সবচেয়ে বড় অসুবিধা হল যে যদি একা ব্যবহার করা হয় তবে আরও পার্শ্ব প্রতিক্রিয়া হবে। যাইহোক, গবেষণা দেখায় যে সক্রিয়করণ প্রক্রিয়া চলাকালীন HOBt যোগ করা হলে, HOAt এই ধরনের বিকারকগুলি খুব কম পরিসরে পার্শ্ব প্রতিক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করতে পারে। প্রতিক্রিয়া প্রক্রিয়া নিম্নরূপ:

চিত্র 2 DIC সক্রিয়করণ প্রতিক্রিয়া প্রক্রিয়া

Onium লবণ ধরনের ঘনীভবন বিকারক উচ্চ প্রতিক্রিয়াশীলতা এবং দ্রুত গতিসম্পন্ন, এবং এখন ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়, প্রধানত: HBTU, TBTU, HATU, PyBOP অপেক্ষা। এই রিএজেন্ট ব্যবহারের সময়, একটি জৈব বেস যোগ করা প্রয়োজন, যেমন ডাইসোপ্রোপিলেথাইলামাইন (DIEA), N- মিথাইলমরফোলিন (NMM), এই বিকারক যোগ করার পরেই অ্যামিনো অ্যাসিড সক্রিয় করা যেতে পারে। প্রতিক্রিয়া প্রক্রিয়া নিম্নরূপ:

কঠিন-ফেজ পেপটাইড সংশ্লেষণে ব্যবহৃত রেজিনগুলি সাধারণত পলিস্টাইরিন-ডিভিনাইলবেনজিন উপাদান, যার মাপ 75 থেকে 150 μm, ক্রস-লিঙ্কিংয়ের ডিগ্রি 1-2% এর মধ্যে, এবং এখন ব্যবহৃত বেশিরভাগগুলি 1%, কারণ এই ক্রসিং ডিগ্রীতে 1%,{} ডিগ্রী, {} ডিগ্রী, DCM এর ভাল ফোলা বৈশিষ্ট্য রয়েছে এবং এটির একটি ত্রিমাত্রিক নেটওয়ার্ক গঠন রয়েছে এবং বিক্রিয়ক অণুগুলি রেজিনের ভিতরে অবাধে চলাচল করতে পারে। রজনের সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ অংশ হল সংযোগকারী আর্ম, যা এক প্রান্তে রজনের সাথে সংযুক্ত থাকে এবং অন্য প্রান্তে একটি প্রতিক্রিয়া সাইট হিসাবে কাজ করে। বর্তমানে বহুল ব্যবহৃত রেজিনগুলি হল: PAM, MBHA, Wang, 2-Cl-Trt, Rink-Amide-MBHA অপেক্ষা। PAM-এ, MBHA BOC কৌশলে ব্যবহার করা হয়, কারণ এটি অ্যাসিডের জন্য খুব স্থিতিশীল, এটি HF, TFMSA হওয়া প্রয়োজন এটি শুধুমাত্র শক্তিশালী অ্যাসিড অবস্থার অধীনে কাটা যেতে পারে।

কঠিন-ফেজ পেপটাইড সংশ্লেষণ সম্পন্ন হওয়ার পর, রজন থেকে পেপটাইড ছিঁড়ে যাওয়ার জন্য একটি উপযুক্ত ক্লিভেজ বিকারক নির্বাচন করতে হবে, এবং তারপর হিমবাহ ইথার দিয়ে বর্ষণ করতে হবে, সেন্ট্রিফিউগেশনের মাধ্যমে বর্ষণ সংগ্রহ করতে হবে এবং চূড়ান্ত পণ্য পেতে HPLC আলাদা, বিশুদ্ধ এবং ফ্রিজ-শুষ্ক করতে হবে।

নির্বাচিত বিভিন্ন রেজিন এবং অ্যামিনো অ্যাসিড ক্রমগুলির কারণে, ক্লিভেজের সময় নির্বাচিত ক্লিভেজ পদ্ধতিগুলি ঠিক একই নয়। সাধারণত, ক্লিভেজ শর্তগুলি অম্লীয় অবস্থার অধীনে নির্বাচন করা হয়। PAM, MBHA রেজিনের জন্য, সাধারণত ব্যবহৃত HF কাটিং, p-cresol, p-mercaptophenol, anisole এবং অন্যান্য রিএজেন্টগুলি কাটার প্রক্রিয়ার সময় যোগ করতে হবে। এবং Wang, Rink-অ্যামাইড, Trt রেসিন, সাধারণত TFA কাটিং ব্যবহার করা হয়, কাটার প্রক্রিয়ার সময় ইথিলিন গ্লাইকল, অ্যানিসোল সালফাইড, জল, ট্রাইসোপ্রোপাইলসিলেন, ফেনল, ইত্যাদি যোগ করুন।

এই সংযোজন বিকারকগুলি প্রধানত কার্বোকেশন ক্যাপচার রিএজেন্ট হিসাবে ব্যবহৃত হয়। উদ্দেশ্য হল ক্লিভেজ বিক্রিয়ার সময় উত্পন্ন কার্বোকেশন ক্যাপচার করা এবং কিছু অ্যামিনো অ্যাসিড সাইড চেইনে এই কার্বোকেশন আয়নগুলির আক্রমণের ফলে সৃষ্ট পার্শ্ব প্রতিক্রিয়া কমানো। যে অ্যামিনো অ্যাসিডগুলি পার্শ্ব প্রতিক্রিয়া তৈরি করার সম্ভাবনা বেশি সেগুলির মধ্যে রয়েছে: Trp, Tyr। কাটিং রিএজেন্টের ডোজ সাধারণত 10-15 মিলি/গ্রাম রজন।

সাধারণত ব্যবহৃত কাটিং অনুপাত: HF/p-cresol/p-thiocresol(90/5/5), TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2.5/2.5), প্রতিক্রিয়া সাধারণত ঘরের তাপমাত্রা 2 h-4h এ সঞ্চালিত হয়।

কঠিন-ফেজ পেপটাইড সংশ্লেষণে, আমরা প্রায়ই পেপটাইড সংশ্লেষণ ব্যর্থতা বা কম সংশ্লেষণ দক্ষতার সমস্যার সম্মুখীন হই। প্রধান কারণ পেপটাইড সিকোয়েন্সের কারণে, কারণ কিছু পেপটাইড ক্রম রজনে তৈরি হয়. -ভাঁজ করা রজন এর ফোলা বৈশিষ্ট্য পরিবর্তন করে, এবং রজনে বিক্রিয়ার সক্রিয় স্থানগুলিকে পুঁতেও ফেলতে পারে, প্রতিক্রিয়াটি এগিয়ে যাওয়া কঠিন করে তোলে। বর্তমান রিপোর্ট সে ইঙ্গিত দেয়

মিশ্র দ্রাবক, DMSO/DMF, 6N Guanidine/DMF সমাধান ব্যবহার করুন

প্রতিক্রিয়া তাপমাত্রা বাড়ান বা মাইক্রোওয়েভ পদ্ধতি ব্যবহার করুন

ক্যাওট্রপিক সল্ট ব্যবহার করুন, LiCl, NaClO4 অপেক্ষা করুন।

রজন লোডিং (0.05-0.2 mmol/g) হ্রাস করার সময় আরও ভাল ফোলা বৈশিষ্ট্যযুক্ত PEG-PS রজন ব্যবহার করুন

​